無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒是一種在體外條件下,不依賴活細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)合成的工具。這類試劑盒通常包含細(xì)胞提取物、能量源、氨基酸、輔因子等關(guān)鍵組分,以支持蛋白質(zhì)的合成過(guò)程。
無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒的工作原理基于細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制,但在體外進(jìn)行。當(dāng)加入編碼目標(biāo)蛋白質(zhì)的DNA或RNA模板時(shí),試劑盒中的酶和核糖體會(huì)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程,將DNA或RNA模板轉(zhuǎn)錄成mRNA,并隨后進(jìn)行翻譯,將mRNA翻譯成蛋白質(zhì)。
1、高產(chǎn)量
微克至毫克級(jí)別:無(wú)細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)能夠在較短時(shí)間內(nèi)(通常3-5小時(shí))生產(chǎn)從微克到毫克級(jí)別的蛋白。例如,MembraneMax™蛋白表達(dá)試劑盒可以在4小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生高達(dá)毫克級(jí)的膜蛋白。
適用于多種蛋白類型:該系統(tǒng)不僅可以高效合成可溶性蛋白,還適用于膜蛋白以及需要復(fù)雜修飾的蛋白,如天然翻譯后修飾的蛋白質(zhì)。
2、快速合成
反應(yīng)時(shí)間短:與傳統(tǒng)的基于細(xì)胞的蛋白表達(dá)系統(tǒng)相比,無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的反應(yīng)時(shí)間大大縮短。傳統(tǒng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)需要3-7天,而無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)只需3-5小時(shí)即可完成蛋白合成。
即時(shí)啟動(dòng):無(wú)細(xì)胞蛋白合成反應(yīng)類似于PCR,通過(guò)直接添加各組分即可啟動(dòng),無(wú)需DNA或RNA的轉(zhuǎn)染過(guò)程。
3、易于純化
富集和純化方案:無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒提供了一系列優(yōu)化的標(biāo)簽和純化方案,使得目標(biāo)蛋白易于純化和下游應(yīng)用。例如,MembraneMax™提供了天然和多聚組氨酸標(biāo)記的納米脂蛋白顆粒,使膜蛋白的純化更為便捷。
無(wú)需洗滌劑或重構(gòu):由于無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)不需要洗滌劑或復(fù)雜的膜囊重構(gòu),目標(biāo)蛋白在模擬的細(xì)胞環(huán)境中合成,使得純化過(guò)程更加簡(jiǎn)單高效。
4、高通量篩選
高通量兼容性:無(wú)細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)可以容易地?cái)U(kuò)展到高通量應(yīng)用,這使得它非常適合大規(guī)模的蛋白表達(dá)和篩選項(xiàng)目。
自動(dòng)化和可控性:系統(tǒng)的高度可控性(如時(shí)間、空間、反應(yīng)條件和規(guī)模)使其與自動(dòng)化設(shè)備兼容,進(jìn)一步提升了高通量應(yīng)用的效率。
5、突破性表達(dá)
有毒或難表達(dá)蛋白:無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)能夠表達(dá)在傳統(tǒng)細(xì)胞系統(tǒng)中難以表達(dá)的有毒蛋白或膜蛋白。這一特點(diǎn)為結(jié)構(gòu)和功能研究提供了新的可能,尤其是在抗體工程和酶生物領(lǐng)域。
還原度高活性:無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)合成的蛋白具有高純度和良好的生物活性,從而確保其在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用效果。例如,純度和活性對(duì)于抗體片段的研究尤為重要,而PUREfrex®2.0系統(tǒng)在合成這些蛋白時(shí)表現(xiàn)出色。
